上海軒澤康生物ELISA試劑盒種類(lèi)繁多，根據(jù)產(chǎn)品名稱(chēng)原理大致分為間接法、夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法、捕獲包被法（也稱(chēng)為反向間接法，比較少見(jiàn)）。其中各類(lèi)型試劑盒的基本原理可電詢我司業(yè)務(wù)人員進(jìn)行詳細(xì)了解。以下是關(guān)于各類(lèi)型ELISA試劑盒及適用類(lèi)型：

①間接法：測(cè)定總抗體或IgG抗體

②抗體夾心法：測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上大分子抗原

③抗原夾心法：測(cè)定抗體

④抗體競(jìng)爭(zhēng)法：測(cè)定抗體

⑤抗原競(jìng)爭(zhēng)法：測(cè)定只有一個(gè)抗原決定簇的小分子半抗原

⑥捕獲包被法：測(cè)定IgM,傳染病的早期診斷

檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被血紅蛋白（Hb）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血紅蛋白（Hb）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

試劑的準(zhǔn)備：20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法：

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

科研雞血紅蛋白(Hb)測(cè)定試劑盒ELISA操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

科研雞血紅蛋白(Hb)測(cè)定試劑盒ELISA實(shí)驗(yàn)中問(wèn)題解答：

【檢測(cè)的結(jié)果沒(méi)有吸光度值或吸光度值很低】

可能造成的原因：1.使用的試劑盒已過(guò)有效期 2. 沒(méi)有充分回溫、孵育的溫度太低

上海軒澤康生物為您解答：建議更換有效期以內(nèi)的試劑盒，使用同一批次試劑盒內(nèi)的內(nèi)容物并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行操作。在實(shí)驗(yàn)操作的整個(gè)過(guò)程中仔細(xì)觀察恒溫箱的溫度。

【吸光度值偏高】

可能造成的原因：孵育溫度過(guò)高，反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

上海軒澤康生物為您解答：建議調(diào)整孵育環(huán)境的溫度，如無(wú)法調(diào)整室內(nèi)溫度請(qǐng)將顯色時(shí)間適當(dāng)縮短，控制反應(yīng)時(shí)間。

【陰性樣本的吸光度值低】

可能造成的原因：酶標(biāo)板孔中的試劑未充分的混和

上海軒澤康生物為您解答：注意操作的方法，注意洗滌時(shí)的方法。

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